Chotambala cha HiFidelity PCR Kit

Kukhulupirika kwambiri, kutsimikizika kwapamwamba komanso kuyendetsa bwino PCR koyambirira.

Ultra HiFidelity PCR Kit ndichinthu chatsopano chotsimikizira kukhulupirika kwa PCR choyenera kupangira ndi kuzindikira kwa PCR. Ultra HiFi DNA Polymerase yomwe ili mu chidacho ndi DNA yofulumira komanso yodalirika kwambiri ya DNA polymerase yopangidwa ndi ukadaulo wotsogola wama cell. Zimathandizira kuyanjana kwa DNA polymerase kuma templates, kumathandizira kuthamanga kwamphamvu komanso kuthekera kokulitsa kwa enzyme, ndikuwonjezera kupambana kwa PCR ndi zokolola.

Mphaka. Ayi	Kukulitsa Kukula
4992970	1ml
4992971	5 * 1ml
4992978	5 * 5 * 1ml

Tumizani imelo kwa ife

Mankhwala Mwatsatanetsatane

Chitsanzo Cha Zoyesera

FAQ

Zogulitsa

Mawonekedwe

■ Kugwiritsa ntchito mosavuta: Chikwama ichi chimaperekedwa ngati 2 × premix, ndipo PCR itha kuchitidwa pongowonjezera ma tempuleti ndi zoyambira.
■ Kukhulupirika kwakukulu: Kukhulupirika kumakhala nthawi 50 kuposa Taq polymerase.
■ Kutsogola kwapamwamba: Kuchita bwino kwambiri poyambira kuti muwonetsetse kuti zinthu zikuyenda bwanji ..
■ Kukulitsa mwachangu: Liwiro lokulitsa limatha kufikira 10-15 sec / kb.
■ Kukulitsa kwamphamvu: Mpaka 20 kb tizidutswa ta DNA titha kukulitsidwa.
■ Kugwiritsa ntchito kwakukulu: Chikwamacho chili ndi PCR Enhancer ndipo ndichabwino kukulitsa ma GC apamwamba ndi ma tempulo ovuta.

Mfundo

Mtundu: Kukhulupirika kwambiri kwa DNA Polymerase
Amplification liwiro: 10-15 gawo / kb
Kukula kwa zidutswa: <20kb
Mapulogalamu: Kukhulupirika kwamphamvu kwa PCR, kupangika kwa majini, kukulitsa kwa GC template, kupanga mitundu yama genome ovuta, cDNA kukhulupirika kwakukulu, kuzindikira kwa SNP, kusintha kwa tsamba, etc.
Kuchokera kwa DNA Kuchokera ku Mitundu Yosiyanasiyana ya Zomera:
Chidziwitso: Zokolola za DNA zimatengera mitundu yazitsanzo. Zipangizo zonse zomwe zili pamwambazi ndi zamasamba ofewa.

Zogulitsa zonse zimatha kusinthidwa kukhala ODM / OEM. Zambiri,chonde dinani Makonda Service (ODM / OEM)

Previous: Zamgululi 2 × Pfu PCR Kusakaniza

Ena: QuantScript RT zida

	Hot-kuyamba kuonetsetsa mankhwala enieni Chithunzi 1. Ultra HiFi ili ndi ntchito yabwino kwambiri yoyambira kutsimikizira kutsimikiza kwa zinthu zokulitsa. Njira zama beacons zamagetsi zinagwiritsidwa ntchito (Ma et al., Anal Biochem, 2006).
	Kukhulupirika kwambiri, nthawi 50 kuposa Taq Polymerase Chithunzi 2. Kukhulupirika kwa Ultra HiFi ndikokwera kwambiri 50 kuposa wamba Taq polymerase. Kukhulupirika kwa ma polymerization a Taq polymerase (popanda kukonza) kumagwiritsidwa ntchito ngati kutanthauzira.
	Kukulitsa mwachangu ndi zidutswa zazitali zimatha kukulitsidwa mwachangu Mkuyu. 3. Ultra HiFi itha kufikira 5 sec / kb pa zidutswa zazing'ono kuposa 4 kb. Kwa zidutswa zazitali, nthawi yakukulitsa imatha kupitilizidwa moyenera. Kwa zidutswa zopitilira 15 kb, kuthamanga kwake kumatha kukhala mpaka 30 sec / kb. M: TIANGEN D15000 Chikhomo
	Chilengedwe champhamvu komanso kudziwika kwake, kosavuta kuwerenga kwa GC komanso zidutswa zazitali kuchokera kumagwero osiyanasiyana Chithunzi 4. Ultra HiFi ili ndi mawonekedwe apadera owonetsetsa kuti matalikidwe akuchulukitsa komanso kuchuluka kwa zinthu zosiyanasiyana zamitundu yosiyanasiyana. A. Zotsatira zakukula kwa Ultra HiFi B. Zowonjezera zowonjezera zamagetsi za Hi-Fi za Supplier K C. Kukulitsa mphamvu ya enzyme ya Supplier N M: TIANGEN D15000 Chikhomo Njira 1-5. Kukula kwa ma templates okhala ndi kutalika kosiyanasiyana: 1. 750 bp; 2. 1 kb; 3. 2 kb; 4. 4 kb; 5. 6 kb Njira 6. Zowonjezera zakukwera kwa template ya GC yayikulu: 1915 bp (GC%: 70%); Njira 7-11. Zowonjezera zamitundu ya 2 kb kuchokera kuma genome osiyanasiyana: 7. Khoswe; 8. Mpunga; 9. Tirigu; 10. Chimanga; 11. Mabakiteriya; Njira 12-14. Chotsatira cha 8 kb kutalika kwa zidutswa: 12. Mpunga; 13. Chimanga;

Q: Palibe magulu okweza

Chizindikiro cha A-1

■ Chikhazikitsochi chimakhala ndi zonyansa zomanga thupi kapena Taq inhibitors, ndi zina zambiri. —— Yembekezerani template ya DNA, chotsani zonyansa zamapuloteni kapena chotsani template ya DNA yokhala ndi zida zoyeretsera.

■ Kutengera kwa template sikokwanira ——Kuchulukitsa kutentha kwa chiwonetsero ndikuchulukitsa nthawi yachinyengo.

■ Kuwonongeka kwa ma template - -Konzani templateyo.

Choyamba cha A-2

■ Zoyambira zoyipa - - Re-synthesize the primer.

■ Kuwonongeka koyambirira ——Gwiritsani ntchito zoyambira zazing'ono kwambiri kuti zikhale zocheperako kuti zisungidwe. Pewani kuzizira kangapo kapena kusungunuka kapena kutalika kwa 4 ° C kosungidwa.

Kupanga koyambira koyenera (mwachitsanzo kutalika koyambirira sikokwanira, kupendekera komwe kumapangidwa pakati pazoyambira, ndi zina zambiri) -Konzani zoyambira (pewani kapangidwe kazoyambira ndi kapangidwe kake)

A-3 Mg²⁺ndende

■ Mg²⁺ ndende ndiyotsika kwambiri -—Kuchulukitsa moyenera Mg²⁺ndende: Konzani Mg²⁺ kusakanikirana ndi zochitika zingapo kuchokera 1 mM mpaka 3 mM pakadutsa 0.5 mm kuti adziwe Mg woyenera²⁺ ndende iliyonse ya template ndi choyambira.

A-4 Kutentha kwa Annealing

■ Kutentha kokulumikiza kwakukulu kumakhudza kumangiriza koyambirira ndi template. —Chepetsani kutentha komwe kumakulitsa ndikuwonjezera vutoli ndi gradient ya 2 ° C.

Nthawi yowonjezera-A-5

■ Kuonjezera nthawi yayifupi —— Wonjezerani nthawi yowonjezera.

Funso: Chabodza

Phenomena: Zoyipa zoyeserera zikuwonetsanso magulu omwe akutsata.

A-1 Kuwonongeka kwa PCR

■ Kuwonongeka kwapakati pazinthu zomwe zikulondoleredwa kapena zopititsa patsogolo -—Mosamala kuti musapopetse sampuli yomwe ili ndi cholowa munjira yoyipa kapena kuwataya kunja kwa chubu cha centrifuge. Ma reagents kapena zida ziziyendetsedwa ndi autoclaved kuti zithetse ma nucleic acid omwe alipo, ndipo kupezeka kwa kuipitsidwa kuyenera kutsimikizika kudzera pakuyesa kosayenerera koyeserera.

■ Kuwonongeka kwa reagent ——Pezani mankhwala osungunula ndi kusunga pa kutentha kochepa.

A-2 Yaikulur

■ Mg²⁺ ndende ndiyotsika kwambiri -—Kuchulukitsa moyenera Mg²⁺ ndende: Konzani Mg²⁺ kusakanikirana ndi zochitika zingapo kuchokera 1 mM mpaka 3 mM pakadutsa 0.5 mm kuti adziwe Mg woyenera²⁺ ndende iliyonse ya template ndi choyambira.

■ Mapangidwe oyambira osayenera, ndipo kutsata kwake kumayanjana ndi maphunziro aumwini osagwirizana ndi cholinga chake. ——Zipangitseni zojambula zoyambirira.

Q: Kukulitsa kwapadera

Phenomena: Magulu owonjezera a PCR sagwirizana ndi kukula komwe kumayembekezereka, kaya yayikulu kapena yaying'ono, kapena nthawi zina magulu amakulitsidwe ndi magulu osakondera omwe amapezeka.

Chiyambi cha A-1

■ Kusazindikira koyambirira

——Konzaninso choyambirira.

■ Kutengera koyambira kumakhala kochuluka kwambiri ——Kuchulukitsa moyenera kutentha kwa chiwonetsero chazitali ndikutalikitsa nthawi yakusintha.

A-2 Mg²⁺ ndende

■ Mg²⁺ ndende ndiyokwera kwambiri ——Kuchepetsa moyenera ndende ya Mg2 +: Konzani Mg²⁺ kusakanikirana ndi zochitika zingapo kuchokera 1 mM mpaka 3 mM pakadutsa 0.5 mm kuti adziwe Mg woyenera²⁺ ndende iliyonse ya template ndi choyambira.

A-3 Thermostable polymerase

■ Kuchuluka kwa ma enzyme —— Chepetsani kuchuluka kwa ma enzyme moyenera pakadutsa 0.5 U.

A-4 Kutentha kwa Annealing

■ Kutentha kokulumikiza ndikotsika kwambiri ——

Zozungulira A-5 PCR

■ Zozungulira za PCR zochulukirapo —— Chepetsani kuchuluka kwamachitidwe a PCR.

Q: Magulu olimba kapena opaka

Chiyambi cha A-1——Kusalongosoka kwapafupipafupi ——Konzaninso choyambacho, sinthani malo ndi kutalika kwa zoyambira kuti zithandizire; kapena kuchita PCR yokhazikika.

A-2 Chinsinsi DNA

——Tempempheroli sili loyera ——Tsukitsani template kapena tulutsani DNA yokhala ndi zida zoyeretsera.

A-3 Mg²⁺ ndende

- —Mw²⁺ ndende ndiyokwera kwambiri ——Chepetsani Mg²⁺ ndende: Konzani Mg²⁺ kusakanikirana ndi zochitika zingapo kuchokera 1 mM mpaka 3 mM pakadutsa 0.5 mm kuti adziwe Mg woyenera²⁺ ndende iliyonse ya template ndi choyambira.

A-4 dNTP

——Kuchuluka kwa ma dNTP ndiokwera kwambiri —— Chepetsani kuchuluka kwa dNTP moyenera

A-5 Kutentha kwa Annealing

——Kutentha kochepa kwambiri koloŵeza ——

Zozungulira A-6

—Zochuluka kwambiri m'zinthu —— Yambitsani kuchuluka kwa kayendedwe kake

Q: Ndi ma template angati a DNA omwe akuyenera kuwonjezeredwa mu 50 μl PCR reaction system?

Q: Momwe mungakulitsire zidutswa zazitali?

Gawo loyamba ndikusankha ma polymerase oyenera. Wokhazikika Taq polymerase sangathe kuwerengera chifukwa chosowa 3'-5 'exonuclease, ndipo kusamvana kumachepetsa kwambiri kukulitsa kwa zidutswa. Chifukwa chake, Taq polymerase wamba sangathe kukulitsa bwino zidutswa zokulirapo zopitilira 5 kb. Taq polymerase yosinthidwa mwapadera kapena kukhulupirika kwakukulu kwa polymerase kuyenera kusankhidwa kuti ikuthandizire kukulitsa zowonjezera ndikukwaniritsa zosowa zamagawo ataliatali. Kuphatikiza apo, kukulitsa kwa zidutswa zazitali kumafunikanso kusintha kofananira kwa kapangidwe koyambira, nthawi yoperekera nthawi, nthawi yowonjezera, pH ya buffer, ndi zina zambiri. Nthawi zambiri, zopangira 18-24 bp zimatha kubweretsa zokolola zabwino. Pofuna kupewa kuwonongeka kwa template, nthawi yodzitchinjiriza yomwe ili pa 94 ° C iyenera kuchepetsedwa kukhala 30 sec kapena kuchepera pakazungulira, ndipo nthawi yokwera kutentha mpaka 94 ° C kukweza kusanachepe 1 min. Kuphatikiza apo, kukhazikitsa kutentha kwazitali pafupifupi 68 ° C ndikupanga nthawi yowonjezera malinga ndi kuchuluka kwa 1 kb / min kumatha kutsimikizira kukulitsa kwa zidutswa zazitali.

Q: Kodi mungakonze bwanji kukulitsa kukhulupirika kwa PCR?

Kuchuluka kwa zolakwika za PCR kumatha kuchepetsedwa pogwiritsa ntchito ma polymerases a DNA mosadukiza. Mwa ma Taq DNA polymerases onse omwe apezeka mpaka pano, enzyme ya Pfu ili ndi zolakwika zotsika kwambiri komanso kukhulupirika kwambiri (onani tebulo lolumikizidwa). Kuphatikiza pa kusankha kwa ma enzyme, ofufuza amatha kupititsa patsogolo kusintha kwa kusintha kwa PCR pokonza momwe zinthu zikuyendera, kuphatikiza kukhathamiritsa kophatikizira, kuchuluka kwa ma polymerase osakanikirana ndikukwaniritsa kuchuluka kwa PCR.

Lembani uthenga wanu apa ndi kutumiza kwa ife