2 × Pfu PCR Kusakaniza

Kukhulupirika kopanda tanthauzo la Taq DNA polymerase.

Pfu DNA Polymerase imafotokozedwa kuchokera ku E. coli yokhala ndi majini a Pyrococus Furiosis DNA Polymerase ndipo amayeretsedwa ndikulekanitsidwa ndi kuyeretsedwa kwamitundu ingapo. Chifukwa Pfu ali ndi zochitika za 3'-5 'zosakhululukidwa, zitha kuwerengera momwe DNA ikukulitsira, pomwe chikhalidwe cha Taq DNA Polymerase sichitha. Ngakhale ma Taq DNA polymerases ena monga Vent, Deep Vent, Tli, UITma, ndi ena ali ndi ntchito zowerengera, Pfu ili ndi zolakwika zochepa kwambiri pakati pa ma Taq DNA polymerases onse omwe apezeka pano. Pfu DNA Polymerase imakhala bwino kwambiri kuposa Taq DNA polymerase, ndipo imatha kupitilira 90% pa 95 ° C kwa ola limodzi.

Kachubu kamodzi Pfu PCR Sakanizani (National High-Tech Product Certification)

■ Kusakanikirana kwa Pfu PCR kwasintha mwatsatanetsatane komanso kuzindikira kwamachitidwe a PCR ndipo kumatha kukulitsa ma tempuleti ovuta okhala ndi GC, kapangidwe kachiwiri ndi zina zotero. Makope awiri a template yomwe mukufuna kutsatirayo itha kukulitsidwa, kutsimikizira zotsatira zoyeserera zolondola.

■ Njira yapadera ya Pfu MasterMix imapangitsa kuti magwiridwe antchito onse akhale osasunthika, ndipo zochitikazo sizingakhudzidwe ndi kuzizira mobwerezabwereza kapena kusungitsa kwakanthawi kwa 4 ° C.

■ Kukhazikika kosasunthika komanso koyenera kwa PCR kusakaniza yankho kumatha kupanga ntchito mwachangu komanso kosavuta, kumachepetsa kwambiri kuchuluka kwa ntchito ndi zolakwika zazitsanzo. Mawonekedwe apamwamba a PCR opititsira patsogolo komanso ophatikizira amaphatikizidwanso mu kusakanikirana, komwe kumachepetsa zofunikira pamikhalidwe ya PCR.

■ Chogulitsachi chili ndimakina okhala ndi utoto komanso opanda utoto. Zinthu zopaka utoto za PCR Mix zitha kusankhidwa mwachindunji pambuyo pa PCR, osawonjezera gawo loyesera.

Mphaka. Ayi	Kukulitsa Kukula
4992780	1ml
4992781	5 * 1ml
4992782	1ml
4992906	5 * 1ml

Tumizani imelo kwa ife

Mankhwala Mwatsatanetsatane

Kayendedwe

FAQ

Zogulitsa

Tanthauzo Lantchito

Zochita za 1 unit (U) Pfu DNA Polymerase zimatanthauzidwa ngati kuchuluka kwa enzyme yomwe imayenera kuphatikizira 10 nmol deoxynucleotides muzinthu zosasungunuka acid pa 74 ° C mkati mwa 30 min pogwiritsa ntchito umuna wa salmon wa DNA monga template / primer.

Kuwongolera Kwabwino

Chiyero chodziwika ndi SDS-PAGE ndi choposa 99%; Palibe zochitika zakunja kwa nuclease zomwe zapezeka; Mtundu wamtundu umodzi wamtundu wamunthu ukhoza kukulitsidwa bwino; Palibe kusintha kwakukulu pazochitika zikasungidwa kutentha kwa sabata imodzi.

Main zaumisiri magawo

Ili ndi zochitika za 3'-5 'zosakhululukirana ndipo palibe 5'-3 "yochita zakhululukidwe. Kuthamanga kwakukula kwa kukweza kwa DNA ndikotsika kuposa kwa Taq polymerase, ndipo makamaka kuthamanga kwa enzyme ya Pfu ndi 0.5-1 kb pamphindi. Kukhazikika kwa Pfu ndikwabwino kuposa Taq. Kwa ma tempuleti okhala ndi GC yayikulu, kutentha kwa denaturation kumatha kukwezedwa mpaka 98 ° C, komwe sikukhudza zochitika za Pfu polymerase. Zogulitsa za PCR ndizopanda pake, zomwe zitha kuwonjezeredwa ndi ma 3'-dA overhangs asanagwirizane ndi vekitala wa TA kapena opangidwa ndi vetala osatha

Mapulogalamu

Itha kugwiritsidwa ntchito pakukweza kwambiri kukhulupirika kwa DNA, monga kupangika kwa majini, kusintha kwa tsamba, kuwunika kwa nucleotide polymorphism (SNP) ndikumaliza kukonza.

Zogulitsa zonse zimatha kusinthidwa kukhala ODM / OEM. Zambiri,chonde dinani Makonda Service (ODM / OEM)

Previous: Zamgululi Fast Site-Directed Mutagenesis Kit

Ena: Chotambala cha HiFidelity PCR Kit

Gwiritsani ntchito genomic DNA ngati template kuti mukweze chidutswa cha 1kb.
Pambuyo poyankha kwa PCR, tengani 5 μl kuti muzindikire electrophoresis.

Q: Palibe magulu okweza

Chizindikiro cha A-1

■ Chikhazikitsochi chimakhala ndi zonyansa zomanga thupi kapena Taq inhibitors, ndi zina zambiri. —— Yembekezerani template ya DNA, chotsani zonyansa zamapuloteni kapena chotsani template ya DNA yokhala ndi zida zoyeretsera.

■ Kutengera kwa template sikokwanira ——Kuchulukitsa kutentha kwa chiwonetsero ndikuchulukitsa nthawi yachinyengo.

■ Kuwonongeka kwa ma template - -Konzani templateyo.

Choyamba cha A-2

■ Zoyambira zoyipa - - Re-synthesize the primer.

■ Kuwonongeka koyambirira ——Gwiritsani ntchito zoyambira zazing'ono kwambiri kuti zikhale zocheperako kuti zisungidwe. Pewani kuzizira kangapo kapena kusungunuka kapena kutalika kwa 4 ° C kosungidwa.

Kupanga koyambira koyenera (mwachitsanzo kutalika koyambirira sikokwanira, kupendekera komwe kumapangidwa pakati pazoyambira, ndi zina zambiri) -Konzani zoyambira (pewani kapangidwe kazoyambira ndi kapangidwe kake)

A-3 Mg²⁺ndende

■ Mg²⁺ ndende ndiyotsika kwambiri -—Kuchulukitsa moyenera Mg²⁺ndende: Konzani Mg²⁺ kusakanikirana ndi zochitika zingapo kuchokera 1 mM mpaka 3 mM pakadutsa 0.5 mm kuti adziwe Mg woyenera²⁺ ndende iliyonse ya template ndi choyambira.

A-4 Kutentha kwa Annealing

■ Kutentha kokulumikiza kwakukulu kumakhudza kumangiriza koyambirira ndi template. —Chepetsani kutentha komwe kumakulitsa ndikuwonjezera vutoli ndi gradient ya 2 ° C.

Nthawi yowonjezera-A-5

■ Kuonjezera nthawi yayifupi —— Wonjezerani nthawi yowonjezera.

Funso: Chabodza

Phenomena: Zoyipa zoyeserera zikuwonetsanso magulu omwe akutsata.

A-1 Kuwonongeka kwa PCR

■ Kuwonongeka kwapakati pazinthu zomwe zikulondoleredwa kapena zopititsa patsogolo -—Mosamala kuti musapopetse sampuli yomwe ili ndi cholowa munjira yoyipa kapena kuwataya kunja kwa chubu cha centrifuge. Ma reagents kapena zida ziziyendetsedwa ndi autoclaved kuti zithetse ma nucleic acid omwe alipo, ndipo kupezeka kwa kuipitsidwa kuyenera kutsimikizika kudzera pakuyesa kosayenerera koyeserera.

■ Kuwonongeka kwa reagent ——Pezani mankhwala osungunula ndi kusunga pa kutentha kochepa.

A-2 Yaikulur

■ Mg²⁺ ndende ndiyotsika kwambiri -—Kuchulukitsa moyenera Mg²⁺ ndende: Konzani Mg²⁺ kusakanikirana ndi zochitika zingapo kuchokera 1 mM mpaka 3 mM pakadutsa 0.5 mm kuti adziwe Mg woyenera²⁺ ndende iliyonse ya template ndi choyambira.

■ Mapangidwe oyambira osayenera, ndipo kutsata kwake kumayanjana ndi maphunziro aumwini osagwirizana ndi cholinga chake. ——Zipangitseni zojambula zoyambirira.

Q: Kukulitsa kwapadera

Phenomena: Magulu owonjezera a PCR sagwirizana ndi kukula komwe kumayembekezereka, kaya yayikulu kapena yaying'ono, kapena nthawi zina magulu amakulitsidwe ndi magulu osakondera omwe amapezeka.

Chiyambi cha A-1

■ Kusazindikira koyambirira

——Konzaninso choyambirira.

■ Kutengera koyambira kumakhala kochuluka kwambiri ——Kuchulukitsa moyenera kutentha kwa chiwonetsero chazitali ndikutalikitsa nthawi yakusintha.

A-2 Mg²⁺ ndende

■ Mg²⁺ ndende ndiyokwera kwambiri ——Kuchepetsa moyenera ndende ya Mg2 +: Konzani Mg²⁺ kusakanikirana ndi zochitika zingapo kuchokera 1 mM mpaka 3 mM pakadutsa 0.5 mm kuti adziwe Mg woyenera²⁺ ndende iliyonse ya template ndi choyambira.

A-3 Thermostable polymerase

■ Kuchuluka kwa ma enzyme —— Chepetsani kuchuluka kwa ma enzyme moyenera pakadutsa 0.5 U.

A-4 Kutentha kwa Annealing

■ Kutentha kokulumikiza ndikotsika kwambiri ——

Zozungulira A-5 PCR

■ Zozungulira za PCR zochulukirapo —— Chepetsani kuchuluka kwamachitidwe a PCR.

Q: Magulu olimba kapena opaka

Chiyambi cha A-1——Kusalongosoka kwapafupipafupi ——Konzaninso choyambacho, sinthani malo ndi kutalika kwa zoyambira kuti zithandizire; kapena kuchita PCR yokhazikika.

A-2 Chinsinsi DNA

——Tempempheroli sili loyera ——Tsukitsani template kapena tulutsani DNA yokhala ndi zida zoyeretsera.

A-3 Mg²⁺ ndende

- —Mw²⁺ ndende ndiyokwera kwambiri ——Chepetsani Mg²⁺ ndende: Konzani Mg²⁺ kusakanikirana ndi zochitika zingapo kuchokera 1 mM mpaka 3 mM pakadutsa 0.5 mm kuti adziwe Mg woyenera²⁺ ndende iliyonse ya template ndi choyambira.

A-4 dNTP

——Kuchuluka kwa ma dNTP ndiokwera kwambiri —— Chepetsani kuchuluka kwa dNTP moyenera

A-5 Kutentha kwa Annealing

——Kutentha kochepa kwambiri koloŵeza ——

Zozungulira A-6

—Zochuluka kwambiri m'zinthu —— Yambitsani kuchuluka kwa kayendedwe kake

Q: Ndi ma template angati a DNA omwe akuyenera kuwonjezeredwa mu 50 μl PCR reaction system?

Q: Momwe mungakulitsire zidutswa zazitali?

Gawo loyamba ndikusankha ma polymerase oyenera. Wokhazikika Taq polymerase sangathe kuwerengera chifukwa chosowa 3'-5 'exonuclease, ndipo kusamvana kumachepetsa kwambiri kukulitsa kwa zidutswa. Chifukwa chake, Taq polymerase wamba sangathe kukulitsa bwino zidutswa zokulirapo zopitilira 5 kb. Taq polymerase yosinthidwa mwapadera kapena kukhulupirika kwakukulu kwa polymerase kuyenera kusankhidwa kuti ikuthandizire kukulitsa zowonjezera ndikukwaniritsa zosowa zamagawo ataliatali. Kuphatikiza apo, kukulitsa kwa zidutswa zazitali kumafunikanso kusintha kofananira kwa kapangidwe koyambira, nthawi yoperekera nthawi, nthawi yowonjezera, pH ya buffer, ndi zina zambiri. Nthawi zambiri, zopangira 18-24 bp zimatha kubweretsa zokolola zabwino. Pofuna kupewa kuwonongeka kwa template, nthawi yodzitchinjiriza yomwe ili pa 94 ° C iyenera kuchepetsedwa kukhala 30 sec kapena kuchepera pakazungulira, ndipo nthawi yokwera kutentha mpaka 94 ° C kukweza kusanachepe 1 min. Kuphatikiza apo, kukhazikitsa kutentha kwazitali pafupifupi 68 ° C ndikupanga nthawi yowonjezera malinga ndi kuchuluka kwa 1 kb / min kumatha kutsimikizira kukulitsa kwa zidutswa zazitali.

Q: Kodi mungakonze bwanji kukulitsa kukhulupirika kwa PCR?

Kuchuluka kwa zolakwika za PCR kumatha kuchepetsedwa pogwiritsa ntchito ma polymerases a DNA mosadukiza. Mwa ma Taq DNA polymerases onse omwe apezeka mpaka pano, enzyme ya Pfu ili ndi zolakwika zotsika kwambiri komanso kukhulupirika kwambiri (onani tebulo lolumikizidwa). Kuphatikiza pa kusankha kwa ma enzyme, ofufuza amatha kupititsa patsogolo kusintha kwa kusintha kwa PCR pokonza momwe zinthu zikuyendera, kuphatikiza kukhathamiritsa kophatikizira, kuchuluka kwa ma polymerase osakanikirana ndikukwaniritsa kuchuluka kwa PCR.

Lembani uthenga wanu apa ndi kutumiza kwa ife